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浅析圆筒实验(cylinder test)的测试方法及注意事项
点击次数:370 发布时间:2022-06-01

圆筒实验(cylinder test)主要针对不对称中枢神经系统疾病,如帕金森病、阿尔茨海默病、脑卒中等,研究大鼠在贴壁站立过程中前肢的对称性和使用率。实验将大鼠置于一个透明的树脂玻璃圆筒中3~10 min,摄像记录其活动情况。圆筒的形状能够刺激大鼠用前肢垂直探索筒壁,记录3 min内大鼠后肢站立时前肢最初承重触及筒壁的次数,并分别记录左、右侧触及和双侧触及的次数。相关文献报道,大鼠在局灶性脑缺血后,在圆筒实验中前肢的使用情况具有不对称性,且在前肢垂直探索筒壁的过程中,更倾向于使用正常前肢。

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实验方法

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实验准备

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  1. 最好在小鼠活跃期(暗循环)进行圆筒测试。
    注意:将所有测试的小鼠保持在反向光/暗循环上很方便。

  2. 在实验前一天用防水记号笔标记老鼠的尾巴,这样可以快速识别笼中的小鼠,并在测试前尽量避免高水平的压力。

  3. 在一天中的同一时间进行所有行为评估。

  4. 将圆筒放在桌子或实验室工作台的中心。使用黑色窗帘覆盖圆柱体的所有侧面,以尽量减少对老鼠的视觉干扰。
    注意:在圆筒所在的表面上画一条线,以确保圆筒可以返回到相同的位置。

  5. 在弱光条件下进行测试。黑暗的环境会激发老鼠的探索本能。在我们的动物设施中,我们使用天花板白光作为主要照明源。该光源由调光开关控制,可在圆柱体上方提供 40 勒克斯。
    注意:确保照明条件足以清楚地看到视频记录中圆柱体周围的前肢使用情况。

  6. 在测试前让老鼠适应测试室至少 30 分钟。提供与测试相同的光照条件。让老鼠不受干扰地休息。


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行为分析

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  1. 开始录像。

  2. 用动物识别标记测试卡并记录 3 秒。 

  3. 将老鼠放入玻璃圆柱体的中间并启动计时器(下图)。

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  4. 记录小鼠 10 分钟。在测试结束时,立即将鼠标放回其家笼。

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  5. 用肥皂和水清洁气缸。 

  6. 用 70% 乙醇喷洒圆筒以去除任何气味痕迹。 

  7. 在下一次测试之前让玻璃圆筒干燥。 

  8. 对所有测试的小鼠重复步骤 。


  9. 将所有老鼠送回鼠笼。


数据分析





  • 计算右爪、左爪或双爪的触壁次数(同时双爪接触)

  • 将数据表达为受损前肢相对于总接触的百分比 [(对侧触摸)/(同侧触摸 + 对侧触摸) x 100]

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注意事项



  1. 玻璃圆筒的大小可能会根据小鼠品系的大小而有所不同。更大或更活跃的应变可以通过跳到气缸的边缘来试图逃脱。在这种情况下,应使用更高的气缸。我们在本协议中使用的气缸适用于 C57BL/6 小鼠。

  2. 一些研究人员使用放置在圆柱体旁边的镜子来确保在视频记录中看到前肢。 

  3. 在测试之前不要使小鼠习惯于气缸。这可能导致老鼠很少或没有探索的倾向。

  4. 试验持续时间因方案而异。5 到 10 分钟的试验足以获得足够数量的运动以进行可靠测量。在这段时间之后,大多数老鼠都不太活跃。

  5. 最好在隔音室中进行此测试,因为大声的噪音会分散鼠标的注意力。如果无法做到这一点,请在门和附近区域添加一个显示“正在进行实验"的标志,以消除任何对话。


  6. 大多数研究通常每组使用 8 到 10 只小鼠。

  7. 进行行为分析的实验人员不应该对被小鼠可见。


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