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还在为小鼠悬尾实验结果“头疼”吗?测试过程中这些细节您注意了吗?
点击次数:37 发布时间:2022-05-11

小鼠悬尾测试可用于筛选潜在的抗抑郁药物,并评估预期会影响抑郁相关行为的操作。测试时,用胶带将老鼠的尾巴悬挂起来,使其无法逃脱或抓住附近的物体。整个测试期通常持续时间为6分钟。悬尾实验是药物发现中一种有价值的工具,可用于高通量筛选潜在的抗抑郁化合物。今天,我们将和大家一起了解悬尾实验测试过程中的细节,并特别强调可能发生的潜在问题以及如何避免这些问题。

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实验材料

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悬尾箱



悬尾实验箱通常有塑料制成,尺寸通常为高55cm*宽60cm*深11.5cm,为了防止动物相关观察或互动,实验箱中间有挡板将小鼠隔开来,同时保证每只小鼠的隔间足够宽敞,小鼠不能触碰到墙壁,每个隔间大小建议不低于这个尺寸:高55cm*宽15cm*深11.5cm。小鼠的鼻子与实验箱地板之间的大致距离建议为 20-25 cm。

每个隔间顶部装有一个铝制吊杆,用于悬挂小鼠的尾巴。需要注意,如果使用大型远交小鼠品系(例如 CD-1),则需要相应增加尾部悬吊箱的各个隔室的大小。在每个隔间的底部,放置一个可拆卸移动的铝制托盘,用于收集动物的粪便或尿液。


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胶带



胶带是我们日常生活中比较常见的工具,但是在悬尾测试中胶带的选择是至关重要的胶带应牢固地粘在小鼠的尾部和吊杆上,并且强度足以承受被测小鼠的重量。同时,胶带也不应该太粘,因为我们会在每个测试结束后取下动物,避免给动物带来疼痛应激。这里,我们建议选择医用胶带,动物的尾巴皮质比较接近于人的皮肤。另外,胶带在每个小鼠尾巴粘贴的位置也要注意,尽量保持统一。


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悬尾分析软件



悬尾分析软件的核心算法选择也很重要,与旷场实验等测试不同,悬尾测试不应该追踪动物的质心/重心。VisuTrack动物行为分析软件(上海欣软)通过考察小鼠四肢的真实运动情况,实时分析小鼠摇摆不动(绝望状态)、挣扎行为等指标,自动存储原始实验视频。


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白噪声发生器(可选)



噪声发生器可以掩盖间歇性或者突发的环境声音。特别推荐在实验室环境中使用噪音发生器,在这些环境中可以听到可能会吓到老鼠的突然响亮的噪音。在部分实验室中,环境噪声水平(未激活白噪声发生器)约为 60 dB。在进行 TST 的位置激活白噪声发生器的总声级为 70-72 dB。但需要注意的是,这些数字仅作为示例提供,每个实验室应根据其独特的环境和情况选择合适的噪音水平。


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清洁用品



每次测试结束后,使用消毒溶液,彻底擦拭悬挂盒。


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亚克力透明套管(可选)



为了有效防止小鼠在测试过程中长时间攀爬,可以使用亚克力套管套在小鼠尾巴上,再进行悬挂,具体方法可以参考以下视频,效果棒棒哒!






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实验步骤



1、调节好相机,尽可能靠近动物,获得较高清晰度的视频

2、开启白噪声发生器,掩盖外部噪声。避免高音量,并确保所有动物使用相同级别的白噪声。

3、将待测小鼠带入测试房间适应,通常至少一小时。请注意,放置在同一个房间的其他动物可以感知嗅觉和超声波信号。

4、将胶带粘在老鼠的尾巴上。使用胶带的标记端并确保胶带粘在尾部并重新贴在自身上。胶带应贴在尾巴的最末端,在胶带外留下 2-3mm的尾巴。

5、以最短的时间,将胶带或者老鼠尾巴固定到悬尾箱顶部的挂钩上,因为过长时间的拖延会对小鼠有压力。

6、使用VisuTrack软件预先设置好的参数,实验采集分析6分钟。

7、将小鼠送回它们的饲养笼后,从收集盘中丢弃粪便和尿液,并用消毒溶液擦拭装置。




VisuTrack软件分析小鼠悬尾实验



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实验“谜团"



1、小鼠悬尾实验测试时长通常为6分钟,与强迫游泳实验不同,小鼠在悬尾实验早期更容易表现出不动状态。

2、测试中,只有小鼠的前肢活动,但后肢未动的情况,一律视为动物摇摆不动行为(绝望状态)。

3、由于运动惯性,小鼠的类似“钟摆"活动也需要一律视为动物摇摆不动行为(绝望状态)。

4、悬尾实验较强迫游泳实验,没有因浸入水中而导致体温过低的风险,这2个实验在灵敏度和性能存在各种重要差异,并且一项测试的结果不一定会在另一项测试中复制

实验差异,可参考这2篇文献:

  • Cryan JF, Mombereau C, Vassout A. The tail suspension test as a model for assessing antidepressant activity: review of pharmacological and genetic studies in mice. Neurosci. Biobehav. Rev. 2005;29:571–625.

  • O'Leary OF, Cryan JF. In: Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice. Gould TD, editor. Vol. 42. Humana Press; 2009. pp. 119–137.

5、TST 不建议使用体重较大的大鼠,因为这些动物仅靠尾巴支撑体重可能会很痛苦。同样,对于异常重的小鼠(例如用于模拟肥胖的小鼠)应谨慎,在这些情况下,实验者应寻找替代测试,例如强迫游泳测试。

6、预先用旷场实验测量小鼠的整体活动水平很有必要,可有效防止在悬尾实验中产生虚假结论。

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