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浅析光遗传学技术在三箱社交行为实验中的测试方法与注意事项
点击次数:46 发布时间:2021-03-22

1、 动物三箱社交自由探索实验(three chamber free exploring test)

小鼠天性对新奇事物有好奇心,研究表明,与熟悉的环境相比,小鼠对不 熟悉的环境有更强探索yu望。本实验是在一个(20+8+20) *20cm的位置偏好箱 中完成的,包含左侧箱、右侧箱和中间箱(自由运动时小鼠从中间箱放入,避 免人为控制的左右箱进入顺序对实验结果造成影响)。自由探索实验(free exploring)以及后面将要提到的实时位置偏好实验均是用这种三箱装置完成, 每套三箱设备使用不同的花纹的壁纸以及不同纹路地板作为不同环境。所用到 的壁纸有四种图案,A.黑白星形格B.斜黑白条纹C.黑白方格D.竖直黑白 条纹,本文所用到的地板有两张,地板1.左侧平板,右侧浅斜条纹;地板2. 侧空心圆格,右侧空心条纹,将环境与地板配对使用。

环境自由探索实验旨在评价小鼠的探索行为,研究目标脑区及环路在探索 行为中所起的作用。自由探索实验中,所用到环境为A.黑白星形格+B.斜黑白 条纹壁纸和地板1左侧平板,右侧浅斜条纹,每次实验前均需测试小鼠对三箱 环境偏好的基础值,即baseline测定。

2、主要材料和设备

材料和设备厂商信息

 

行为测试箱

 
摄像头上海欣软
摄像头支架 
采集卡上海欣软
SuperMaze动物行为分析软件上海欣软
473nm蓝光激光器杭州纽顿

 

3、三箱社交探索实验基本步骤

本文采用的自由探索行为实验(free exploring)包括连续三天的测试。

  • 第YI天为基线baseline检测,每只小鼠放入中央箱之后开始自由探索,每 只小鼠探索时间为20min,软件将自动记录小鼠运动轨迹、平均速度以及在各 箱所停留的时间进入次数等参数,将其记为baselineo

  • 第二天为training阶段,用中间隔板将小鼠限制于某一侧环境,让其在zhi定的20*20cm单侧箱内自由探索,并同时给予473nm LED光照,刺激参数 BLA/NAC均为20Hz, 15ms,光纤末端光强10mw左右。(为避免激光损输出 伤,刺激模式为3s-on-3s-off不断循环,直到20min测试时间束。)

  • 第三天为test阶段,位置偏好箱两侧均正常开放,将小鼠置于中央箱,令 其自由探索20min,并利用软件系统自动记录小鼠运动轨迹、平均速度以及在 各箱所停留的时间、进入次数等参数,将其记为Test

(环境探索实验使用的三箱环境为A.黑白星形格+ B.斜黑白条纹壁纸和地 板1左侧平板,右侧浅斜条纹。由于第二天training阶段在zhi定封闭环境中给 光刺激20min,在第三天test时,与非刺激环境相比,该光刺激环境对于小鼠 而言是熟悉的环境(familiar),因此由于对不熟悉环境的探索天性,小鼠在 test阶段理论上将对非光照的不熟悉环境表现出更强的偏好性。) 

4、注意事项

(I) .为避免激光损伤,蓝色激光刺激模式为间歇给光。

(II) .每次实验前,小鼠先放入彳丁为学室适应半小时以上。

(III) .每只小鼠实验结束后,应用75%酒精彻底清洁实验箱,避免小鼠行为结果 受到上一只小鼠的气味影响。


 

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