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高架十 字迷宫与针刺zhi疗大鼠酒精戒断焦虑征的作用机制
点击次数:252 发布时间:2020-04-07

摘要:目的:观察针刺对大鼠酒精戒断焦虑样症状的zhi疗作用,探究针刺zhi疗大鼠酒精戒断焦虑样症 状的作用机制。方法:选取健康的SD大鼠,随机分组,分为空白组、模型组、三阴交组、足三里组、电针 两穴(三阴交+足三里)组、针刺两穴阴交+足三里)组,连续腹腔注射酒精(ethanol,Eth) 28 d,制备酒 精成瘾模型,撤酒精3 d,制备酒精戒断模型,撤酒精期间分别针刺相应穴位进行zhi疗,针刺3 d,高架十 字迷宫(EPM)测其焦虑行为,ELISA测海马中促肾上腺皮质ji素释放ji素、环磷酸腺苷浓度。结果:与 空白组比较,酒精戒断大鼠停留在开放臂的次数和时间明显减少(P<〇.〇5),海马中cAMP、CRH的浓度 明显升高(P<〇. 01);与模型组相比较,电针两穴组和针刺两穴组在EPM开放臂的的停留次数、时间明 显地增加(P<〇.〇5),海马中cAMP、CRH的浓度明显降低(P<0.01),而单穴位组对各检测指标的作用效 果不明显(P>0.05)$结论:针刺能缓解酒精戒断焦虑征大鼠的焦虑,其抗焦虑的作用机制可能与调节 大鼠脑内海马组织中cAMP-CRH相互作用有关。

关键词:针刺;焦虑;酒精戒断;促肾上腺皮质ji素释放ji素;环磷酸腺苷

 

实验仪器

高架十字 迷宫:上海欣软信息科技有限公司

 

行为学指标测试

实验室内光线昏暗并保持恒亮,室温24°C,保持 安静。将每只大鼠置于高空十字架(EPM)的正中央 释放,每只大鼠测试时间为5 min。每一只动物完成测 试后,清理粪便,并对装置用酒精进行彻底清洁消du。

测试指标:进入到开放臂次数(0E):即进入到任 ¥开放臂的次数,以大鼠4个爪均进入到臂内开始,中 途有1个爪从该臂中完全撤出,视为该次进入活动完 成;进入到开放臂时间(0T):进入到开放臂停留的时 间,单位:秒U);进入到闭合臂次数(CE):即进入到任 一闭合臂的次数,以大鼠4个爪均进入到臂内开始,中 途有1个爪从该臂中完全撤出,视为该次进入活动完 成;进入到闭合臂时间(CT),进入到闭合臂停留的时 间,单位:秒(s)。由以上指标分别计算出:①进开放 臂次数比例〇E% = OE“OE+CE) xl〇〇%;②开放臂停 留时间 t匕例 〇T% = OIV(OT+CT) xl〇〇%

 

讨论

焦虑征大多是因为脏腑功能失调、气机失常而导 致神志不安,足M里是足阳明胃经合穴,f阴交是肝、 肾、脾经的交会穴,这两个穴位既能调节所属脏腑的经 气,同时又针对了焦虑征的病理特点进行zhi疗。近年 来,三阴交、足S里作为zhi疗焦虑征的主要穴位,受到 广大学者的关注。有实验证明,电针三阴交可缓解自 然更年期大鼠的焦虑行为[6],针刺足三里可减轻hai洛 因戒断后所产生的焦虑症状,且疗效稳定[7]。本实验 中,我们选取了$阴交和足三里进行针刺zhi疗,观察到 通过同时针刺这两个穴位可明显缓解酒精戒断所产生 的焦虑症状,由此我们猜测针刺这两个穴位可能存在 相互作用而使zhi疗效果得到加强。单穴位的zhi疗效果 并未如相关文献中所了解的那么显著,这可能是由于 针刺的天数和时长不同所导致。电针疗法是应用电针 仪输出脉冲电流,通过毫针作用于经络穴位以达到治 疗ji病目的的一种方法,它将毫针的刺激和电生理的 效应相结合,这种方法不仅可以提高针刺的zhi疗效果, 同时还增加了针刺的zhi疗范围,加强了针刺疏通经络 的作用[8]。有文献报道[9],电针zhi疗焦虑征的效果与 抗焦虑药wu的zhi疗效果相当,且避免了药wu所带来的 依赖性等副作用。在本研究中,多项实验结果也证实 了电针疗法较普通针刺确有更好的疗效。

大量的研究结果显示,当机体受到内外环境的刺 激时,应激反应会表现出一系列的神经***物质的 变化,主要表现为HPA轴的兴奋。下丘脑室旁核是HPA-神经***轴的中qu位点,CRH则是HPA轴激 活的关键性物质。适量的CRH的增多可使机体处于 兴奋的状态,但CRH的含量过高时,则可引起适应性的机制障碍,进而引发多种症状的发生,其中包括焦 虑、抑郁等。有研究表明,在应激刺激下,CRH的浓度 以及CRH mRNA的表达均显著增加[1()]。在焦虑症状 中所观察到的ji素含量的变化主要是由CRH的过度 分泌所导致[11]。新近研究表明,CRH的受体拮抗剂 可作为抗焦虑以及抗抑郁的神经药理学zhi疗方法[12]。 由本实验结果我们也观察到,酒精戒断焦虑征大鼠的 海马中CRH的浓度较空白组大鼠均増加,经针刺zhi疗
后,其数值又下降至正常水平,由此证实了,CRH在焦 虑的发生中占有重要的地位。

焦虑征受多种基因和多种环境因素的调控,目前 发现其可能通过一系列的信号转导级联反应进行调 控。有研究表明,与G蛋白相偶联的cAMP信号传导 通路的异常与焦虑密切相关,这一论证从我们的实验 结果中得到了证实,酒精戒断大鼠的cAMP的浓度升 高,针刺zhi疗后得到缓解。cAMP是体内比较重要的 第二信使,它对多种神经递质的功能发挥起调节作用。 近年来,有大量的研究结果证实,cAMP依赖的PKA 信号通路在酒精依赖的形成过程中具有重要的作用。 环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)作为PKA重要 的下游信号蛋白,在药wu的成瘾中也起着尤为重要的 作用,因此,近年,CREB在酒精成瘾的相关研究中成 为又一备受关注的研究热点。CREB通过结合cAMP 效应元件(CRE)调节基因的转录,CRE是在各种基因 调节区域中的顺式增强子,CRH基因的上游调节区中 存在CRE序列,而且已经证实,CRE的功能与CRH的 转录活性密切相关,由此为我们的实验结果提供证据: 针刺抗焦虑的作用可能通过调节cAMP-CRH相互作 用,终使酒精戒断焦虑征得到缓解。同时由本实验结 果证实了 cAMP、CRH之间可能确存在某种联系,共同 调节酒精戒断焦虑征的发生。

综上所述,本实验探究了针刺可缓解酒精戒断期 间的焦虑样行为,初步证实针刺可能通过cAMP-CRH 相互作用来缓解酒精戒断焦虑样症状,为针刺疗法开 发成为防治酒精复饮的有效zhi疗手段提供实验和理论 依据,也为综合利用中医疗法zhi疗其他du品成瘾提供强有力的实验支持。

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