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朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆的 影响及作用机制研究
点击次数:286 发布时间:2019-12-26

目的:

通过实验研宄,阐明朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆的影响及作用机 制。

方法:

第1部分:朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆的影响

  • 朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响

条件性恐惧模型的复制:将实验动物随机分为空白对照组、模型对照组、给 药组,每组10只。给药组实验动物给予朱砂安神丸混悬液(经灌胃途径给予,

  • 81mg/g),空白对照组、模型对照组均给予相同体积的双蒸水,1次/曰,连续 7日。在末次给药后,将模型对照组、给药组实验动物依次放入条件性恐惧刺激 箱内,适应120秒。在第120秒给予实验动物单一频率声音信号(2000Hz,75dB)。 第125秒,在声音信号的基础上给予实验动物持续5秒的不可逃避的足底电刺激 (0.75mA)第130秒声音信号与电刺激同时结束,130〜190秒内不做任何处理。 第190秒重复120〜190秒过程,连续20次。空白对照组仅给予声音信号不给予 电刺激,其他操作相同。结束后让实验动物在刺激箱内停留120秒后再放回饲养 笼。

恐惧记忆习得测试:复制条件性恐惧模型的次日,将各组实验动物依次再放 入刺激箱内,适应120秒。在第120秒给予实验动物单一频率声音信号(2000Hz, 75dB)。第130秒声音信号结束,130〜190秒内不做任何处理,记录声音信号停 止后60秒内实验动物的值直反应时间。第190秒重复12CM90秒过程,连续5 次。结束后让实验动物在刺激箱内停留120秒后再放回饲养笼。记录各组实验动 物的僵直反应时间,以此作为观测指标探究朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记 忆习得的影响。

  • 朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆消退的影响

按上述“朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响”实验方法进行

条件性恐惧模型的复制,在习得测试后的第1、3、5、7天,将各组实验动物依 次再放入刺激箱内,重复恐惧记忆习得测试的操作,记录各组实验动物的僵直反 应时间,以此作为观测指标探宂朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆消退的影 响。

  • 朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠自主活动的影响

按上述“朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠恐惧记忆习得的影响”实验方法进行

条件性恐惧模型的复制,在各组实验动物进行条件性恐惧模型复制的次日,将各 组实验动物放入大小鼠开场活动实验箱内,记录各组实验动物运动时间、运动距 离,以此探究朱砂安神丸对条件性恐惧大鼠自主活动的影响。

 

实验仪器

条件性恐惧实验监测系统(上海欣软信息科技有限公司,型号XR-XC404-2), 条件性恐惧刺激箱包含隔音箱和刺激箱,隔音箱为670x650x700mm的斯金纳箱, 可接入摄像头、蜂鸣器、喇叭刺激器等模块。实验箱尺寸为300x300x400mm的 亚克力箱,前后壁透明,左右壁黑白相间,箱子底部为(p4mm不锈钢棒,轴间距 为16mm的不锈钢棒,可通0〜5mA恒定电流;

条件性恐惧实验分析系统上海欣软信息科技有限公司,型号:SuperFcs)

实验结果表明:模型对照组实验动物PS幅值变化率显著高于空白对照组, LTP出现异常的增强。这种突触功能可塑性的改变可能与条件性恐惧刺激过程 中,海马出现应激损伤有关。而给药组实验动物的PS幅值变化率显著低于模型 对照组,与空白对照组更为接近。说明朱砂安神丸能够下调海马异常增强的LTP 7]C平,从而恢复了海马LTP/LTD的正常调节。

LTPLTD的诱导都依赖于NMDA受体,而受体激活后产生的是LTP还 是LTD与突触后膜Ca浓度升高的水平有关。Ca2+浓度迅速的大幅度增加将诱 导LTP而适当程度的増加会诱导LTD正常情况下NMDAGlu结合后将突触 前膜的电信号转化成突触后膜的Ca2+信号,使突触后膜的Ca2+浓度升高,大量 的Ca2M乍为第二信使,可进一步激活生化级联反应,从而改变突触可塑性,产生 LTPLTP产生后,突触后膜的一些信使分子作用于突触前膜,增强Glu的释 放,维持LTP但是,慢性应激增加海马内Glu含量,GluNMDA受体结合, 激活NMDA受体门控的Ca2+通道,引起Ca2+过度内流,增强了 LTP, LTD受 到抑制,结果导致新的记忆不能与已有记忆整合,这可能是恐惧记忆难以消退的 机制之一。

综上所述,本实验确定了朱砂安神丸具有促进恐惧记忆消退的作用,其作用 机理可能是与其保护海马神经元,增强海马突触结构与功能可塑性相关。对于朱 砂安神丸是否能够加强LTD促进新记忆写入己有记忆框架,需要通过测定给 药后实验动物LTD的情况进行实验研究来验证此假说。对于朱砂安神丸具体改 变海马区哪些相关蛋白的表达也有待进一步研究证实。

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